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    原位雜交

    服務內容:

    1.專業的技術團隊使您的實驗高效、準確; 2.豐富的生物分子實驗經驗積累,滿足客戶不同的實驗需求。 3.地高辛標記,完全、方便、省時,敏感性和質量控制較好,可檢測人基因組DNA的單拷貝基因,背景反差好。

    技術簡介

          原位雜交技術(In situ hybridization,ISH)是利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基序列,將有放射性或帶熒光等標記的外源核酸(即探針)與組織、細胞或染色體上待測DNA或RNA互補配對,結合成專一的核酸雜交分子,再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測,將待測核酸在組織、細胞或染色體上的位置顯示出來。

          這一技術不需要從組織細胞中提取核酸,對組織中含量極低的靶序列有很高的靈敏度,并可保持組織與細胞的結構完整,反映特異核酸分子的定位。特別是配合使用能定位特異蛋白分子的免疫細胞化學技術,就能對生理或病理條件下從DNA到mRNA到蛋白質這樣一個基因表達過程進行定性和定位的分析,是基因表達研究強有力的手段。

          地高辛(Digoxigenin 簡寫Dig-)又稱異羥基洋地黃毒甙配基,這種類固醇半抗原僅限于洋地黃類植物,其抗體與其它任何固醇類似物如人體中的性激素等無交叉反應。近年來,地高辛(Digoxigonin)標記技術引起科技工作者的極大興趣。1987年,地高辛標記的有關試劑及藥盒投放市場。地高辛標記法顯示的顏色為紫藍色(標記堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶顯色系統),有較好的反差背景。

          地高辛較放射性標記系統安全,方便、省時間。同時在敏感性和質量控制方面比生物素標記技術要優越,可以檢測出人基因組DNA中的單拷貝基因,是目前應用最廣泛的非放射性標記探針。采用的方法是利用末端轉移酶在單鏈3′-羥基端直接添加DIG-11-dUTP ,從而使地高辛摻入到序列末端,達到標記的目的。地高辛標記的 cDNA、RNA和寡核苷酸探針,不但探針的具有生物素標記優點,還克服了生物素標記的探針在原位雜交過程中受組織內源性生物素干憂等缺點,其應用越來越廣泛。

          本公司進行的RNA原位雜交主要是利用地高辛標記的反義RNA為探針,與切片雜交,從而原位的顯示RNA的表達部位和相對豐度。


    使用領域

          原位雜交能在成分復雜的組織中進行單一細胞的研究而不受同一組織中其它成分的影響,因此對于那些細胞數量少且散在于其他組織中的細胞內DNA或RNA研究更為方便;由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,對于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保持組織與細胞的形態,更能準確地反映出組織細胞的相互關系及功能狀態。

    服務內容

    注:

    1. 組織取材應盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快,所以新鮮組織和培養細胞最好在30 min 內固定。

    2. 固定時間越長,mRNA破壞的越多;做原位雜交組織固定時間不宜過長,一般24h。

    3. 在整個雜交前處理過程都需戴消毒手套,避免RNA污染。

    4. 每個樣本先2-3張預實驗片。


    服務流程

    樣品與實驗結果



    實驗結果示例


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