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    cDNA末端快速克隆

    服務內容:

    本實驗室經過八年反復專研,獨創了一套獨特的技術應用于5'RACE和3'RACE的擴增。多年的RACE實驗經驗,RACE作為本公司的核心技術項目之一,我們有信心能為您獲得幾乎任何一個cDNA的全長序列。

    請在線咨詢或直接聯系17720555749

    技術簡介

            RACE(rapid-amplification of cDNA ends),即cDNA末端快速克隆技術,是一種基于PCR從低豐度的轉錄本中快速擴增cDNA的5'和3’末端的有效方法。相比于其他獲得新基因的方法,RACE原理簡單、無需建立文庫、快速廉價,正受到越來越多科研工作者的重視。


    技術原理
            RACE基于PCR技術基礎之上,先由RT-PCR從RNA中獲取cDNA片段,再通過設計引物向兩端延伸PCR擴增獲得完整的3'端或5'端序列,是一種從低豐度的轉錄本中快速擴增cDNA的5'和3’末端的有效方法。 


    3'末端RACE

            利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以連有SMART寡核苷酸序列通用接頭引物的Oligo(dT)30MN作為鎖定引物反轉錄合成標準第一鏈cDNA。然后用一個基因特異引物作為上游引物,用一個含有部分接頭序列的通用引物作為下游引物,以cDNA第一鏈為模板,進行PCR循環,把目的基因3' 末端的DNA片段擴增出來(圖1)。

    5'末端RACE    

            利用一條基因特異性反轉錄引物,在反轉錄酶的作用下合成cDNA第一鏈,將RNA-DNA雜合鏈中的RNA降解純化后,利用末端轉移酶在cDNA鏈的3’端加入PolyC尾巴,然后利用錨定引物和一條基因特異性引物擴增(圖2)。



    服務內容



    技術流程



    樣品與實驗結果


    注:

    1. 請保證材料或者總RNA新鮮,如果基因的含量較低或者未知序列較長,樣品量需相應增加;

    2. 我們會根據已知序列進行特異性擴增,如果得不到目的序列或為非目的基因的序列,我們將停止實驗并收取實驗成本費用;如果得到序列與您提供的序列有個別堿基不符,我們在征求您的意見后決定是否進行RACE實驗;

    3. 我們將設計跨內含子引物PCR檢驗基因表達水平,如果經驗證,樣品中基因表達含量低時,我們將與您溝通后,決定下一步實驗使用的方法;

    4. 對于原核生物RNA 我們僅進行5' RACE。


    實驗結果圖片示例



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